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應(yīng)用場景一：mRNA純化

mRNA是一類攜帶遺傳信息且能指導(dǎo)蛋白質(zhì)合成的單鏈核糖核酸，滿足合成各種蛋白質(zhì)的所有遺傳信息的要求。許多研究發(fā)現(xiàn)，mRNA可作為許多疾病診斷的工具，包括腫瘤、胃腸道疾病、心血管疾病、關(guān)節(jié)炎、中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病等。

mRNA序列由5個關(guān)鍵結(jié)構(gòu)元件組成：5'帽結(jié)構(gòu)（Cap）、5'非翻譯區(qū)（UTR）、編碼區(qū)（CDS）、3'非翻譯區(qū)（UTR）和poly（A）尾巴。（圖1）

圖1.mRNA結(jié)構(gòu)示意圖

Oligo dT磁珠是最常用的mRNA捕獲載體之一，其表面的oligo dT與真核生物mRNA的poly A尾互補(bǔ)配對，能夠快速高效地從總RNA、細(xì)胞裂解物或帶有poly A尾的體外轉(zhuǎn)錄RNA樣本中分離純化mRNA，下游應(yīng)用于PCR檢測和建庫測序。

圖2.mRNA的qPCR或建庫測序檢測流程圖

應(yīng)用場景二：核酸探針捕獲

Oligo dT磁珠的另一類廣泛應(yīng)用，即固定poly（A）標(biāo)記的核酸探針，進(jìn)行目標(biāo)序列核酸捕獲，下游應(yīng)用于qPCR檢測。

圖3.目標(biāo)核酸的qPCR檢測流程圖

核酸探針和磁珠固定的方法有共價、親和作用、堿基互補(bǔ)配對、離子或偶極作用等方式，根據(jù)用于場景不同各有優(yōu)缺點(diǎn)。目前也有一些分子診斷試劑開發(fā)企業(yè)選擇oligo dT磁珠作為核酸探針固定的載體。

表1. 磁珠表面核酸探針固定的技術(shù)之間的比較

一些分子診斷技術(shù)是利用oligo dT磁珠固定肽-寡核苷酸，分離純化血清中HBV DNA。研究結(jié)果顯示oligo dT磁珠的靈敏度比常規(guī)方法的靈敏度高100倍，且核酸的完整好，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性高CV達(dá)到0.05%。

磁珠推薦

BeaverBeads? Oligo(dT)磁珠表面共價偶聯(lián) Oligo(dT)，可高效地從真核生物總RNA或直接從動植物組織或細(xì)胞裂解物中快速分離出完整、高純度的mRNA；也可固定poly（A）標(biāo)記的核酸探針，用于目標(biāo)序列核酸的捕獲

分離得到的mRNA和靶標(biāo)核酸可用于多種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn):RT-PCR、固相cDNA 文庫構(gòu)建、RACE、Northern等。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

a)    表面活性位點(diǎn)豐富，mRNA捕獲效率高

b)    表面特殊封閉，非特異性吸附低

c)    超順磁性微球，可配套自動化設(shè)備實(shí)現(xiàn)高通量操作

d)    工業(yè)化規(guī)模生產(chǎn)，批次穩(wěn)定

圖4.oligo dT磁珠結(jié)構(gòu)示意圖

mRNA純化數(shù)據(jù)：

樣本：人細(xì)胞Total RNA

上樣量：300ng Total RNA

磁珠用量：20-50uL

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

實(shí)驗(yàn)操作過程中，BeaverBeads Oligo (dT)磁珠的懸浮性與進(jìn)口品牌相當(dāng)。從人細(xì)胞total RNA樣本中純化mRNA，采用熒光定量PCR對樣本進(jìn)行定量檢測，對mRNA（特異性）和sRNA（非特異性）檢測的Ct值偏差＜0.1，兩品牌磁珠無明顯差異。

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